Холерные вибрионы обладают способностью разлагать углеводы и многоатомные спирты при помощи сахаролитических ферментов. Для определения этой способности их засевают на цветной ряд (среда Гисса). Среда состоит из пептонной воды с 0,5% хлористого натрия и 1% сахара (рН = 7,2). В качестве индикатора употребляется лакмус, реактив Андреда и др. Холерные вибрионы образуют кислоту без газа на средах с глюкозой, маннозой, мальтозой, сахарозой, маннитом1 и не изменяют сред с арабинозой и дульцитом.
Детальное изучение сахаролитических свойств холерных вибрионов показало, что различные штаммы обладают неодинаковей сахаролитической активностью. Это в свою очередь позволило Гейбергу разработать классификацию холерных вибрионов, в основу которой он положил способность вибрионов ферментировать три сахара: маннозу, арабинозу и сахарозу. Согласно этой классификации, холерные вибрионы подразделены на 6 групп.
В первую группу входят почти все из исследованных агглютинирующихся вибрионов (99,6%) и только один штамм (0,4%) отнесен ко второй группе. В первую, группу входят также почти все из спонтанно агглютинирующихся штаммов. Неагглютинирующиеся штаммы встречаются во всех группах, но больше всего их во второй, затем в шестой и, наконец, в первой группе. Отношение спонтанно агглютинирующихся и неагглютинирующихся вибрионов к первой группе подтверждают их принадлежность к истинным холерным вибрионам. На основании приведенной классификации все истинные холерные вибрионы должны в течение 24 часов разлагать маннозу и сахарозу и не разлагать арабинозу.
Таким образом, идентификация истинных холерны вибрионов, опирающаяся в основном на их агглютинирующие свойства, дополняется отношением холерны вибрионов к трем углеводам, но последнее не играет решающей роли. Существенное значение имеет отношение к трем указанным углеводам для идентификации неагглютинирующихся и спонтанно агглютинирующихся вибрионов, так как отношение к первой группе подтверждает их принадлежность к истинным холерны вибрионам.
Способность холерных и холероподобных вибрионов разлагать сахара лежит также в основе цветной реакции Фогес-Проскауэра, указывающей на степень разложения глюкозы, доходящего до образования ацетилметилкарбинола. Последний, окисляясь, образует дижцетил, который, соединяясь с составной частью пептож (гуанидином) в присутствии едкого калия дает красное окрашивание среды.
Для постановки реакции засевают культуру на обычный бульон с 0,5% глюкозы и выращивают в течении 24 часов с последующим применением метода Веркина, т. е. сначала добавляют к культуре 2 капли 1% раствора, а затем едкий калий. Окрашивание среды в красный цвет происходит через 20 минут. Истинные холерные вибрионы дают отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, вибрионы Эль-Тор в большинстве случаев — положи тельную. Реакция Фогес-Проскауэра в диагностике холерного вибриона имеет относительное значение, но oна важна для характеристики вибрионов типа Эль-Тор. Большее диагностическое значение имеет действие холерного вибриона на растворимый крахмал.
Оно заключается в разложении крахмала до глюкозы и происходит под влиянием диастазы и других сахаролитических ферментов. Сначала крахмал превращается в декстрин при участии диастазы (амилазы), затем декстрин с помощью декстриназы переходит в мальтозу, а последняя в глюкозу под действием мальтазы. Процесс разложения крахмала идет последовательно и очень быстро доходит до глюкозы (через 5—6 часов).
Для обнаружения диастатической активности холерного вибриона употребляют его 24-часовую культуру на жидких и твердых питательных средах с растворимым крахмалом (0,5%). Для быстрой диагностики берется 6—8-часовая бульонная культура на среде с крахмалом. Для контроля используется незасеянная среда с крахмалом. К культуре и незасеянной среде добавляют раствор йода (йодная настойка, раствор Люголя) и по цвету судят о разложении крахмала. Крахмал, соединяясь с йодом, окрашивается в синий цвет, а глюкоза не окрашивается. Поэтому культура холерного вибриона в жидкой питательной среде с крахмалом при добавлении раствора Люголя остается бесцветной, а в незасеянной контрольной среде окрашивается в синий цвет.
В культуре холерного вибриона на твердой питательной среде с крахмалом при добавлении раствора йода вокруг колоний образуются три зоны: бесцветная — вблизи колоний, розовая — рядом с бесцветной и далее синяя, что зависит от степени разложения крахмала. У старых лабораторных штаммов диастатическая активность ослабевает. Она полностью прекращается при добавлении к среде сахара. Так, на пептонной воде с добавлением крахмала и 1% глюкозы холерные вибрионы не вырабатывают диастазу « не разлагают крахмал.
Другим важным признаком холерных вибрионов является их характерное действие на кровь. Холерные вибрионы не гемолизируют эритроциты барана, а переваривают их с помощью протеазы до гематина, в то время как холероподобные вибрионы гемолизируют их с образованием гемоглобина при помощи гемотоксина (вещество типа фермента).
