В случае исследования сыворотки крови человека, не больного и не болевшего сифилисом, происходит следующее: после проведения первой фазы реакции тщательное промывание препарата полностью удалит все белковые компоненты исследуемой сыворотки крови с поверхности предметного стекла. Вследствие этого бледные трепонемы, находящиеся в виде мазка на поверхности этого стекла, не будет представлять антиген по отношению к наносимой во второй фазе реакции флюоресцирующей иммунной кроличьей сыворотке против глобулинов человека. Промыванием препаратов после второй фазы с поверхности предметного стекла полностью удаляется кроличья флюоресцирующая сыворотка, для которой в данном случае отсутствовал соответственно сформированный антиген. Микроскопическое исследование такого препарата в люминесцентном микроскопе не покажет свечения бледных трепонем.
Результаты РИФ в таком случае будут отрицательными.
