На специальных предметных стеклах готовят препараты из антигена, нанося взвесь бледных трепонем на очерченную окружность. Мазки высушивают при комнатной температуре, затем фиксируют в течение 5 мин в ацетоне. При постановке реакции предметное стекло с фиксированным антигеном помещают во влажную камеру. На антиген наслаивают 1 каплю испытуемой сыворотки крови, разведенной 1: 200 изотоническим раствором хлорида натрия. Первично фаза реакции протекает в условиях влажной камеры при температуре 35 °С в течение 30 мин. По окончании этого периода препараты необходимо тщательно промыть в двух порциях фосфатного буфера с рН 7,2 в течение 10 мин, затем высушить при комнатной температуре. Для проведения второй фазы РИФ высушенные препараты вновь помещают во влажную камеру и наслаивают на них по 1 капле флюоресцирующей сыворотки, разведенной предварительно по соответствующему титру, и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. По истечению этого времени вновь повторяют процедуру промывания препаратов фосфатным буфером. Высушенные препараты монтируют для исследования в люминесцентном микроскопе. Для этого на препарат наносят забуференный глицерин (9 ч. глицерина на 1 ч. фосфатного буфера) и накрывают покровным стеклом, на которое помещают одну каплю иммерсионного масла.
