Каждую испытуемую предварительно проинактивированную сыворотку разливают в две пробирки по 0,05 мл. В 1-ю (опытную) пробирку приливают 0,15 мл активного комплемента морской свинки, во 2-ю (контрольную) — 0,15 мл инактивированного комплемента морской свинки. Антиген, представляющий взвесь бледных трепонем в среде выживания, содержащую 10—15 микроорганизмов в каждом поле зрения, приливают равными объемами по 0,35 мл в 1-ю и во 2-ю пробирки. К каждому опыту ставят контроль с заведомо положительными и отрицательными сыворотками, а также контроль антигена и комплемента. Все пробирки помещают в микроанаэростат, который после удаления атмосферного воздуха заполняют газовым меланжем, состоящим из 95 частей азота и 5 частей углекислого газа. Период выдерживания в термостате, в течение которого наступает полная иммобилизация бледных трепонем в сыворотках крови больных сифилисом, равен 18—20 ч. За это время лизоцим, содержащийся в активном комплементе, растворяет неантигенную защитную оболочку бледных трепонем и таким образом делает их доступными воздействию специфических антител иммобилизинов. В контрольных пробирках, куда введен инактивированный комплемент с разрушенным прогреванием лизоцимом, иммобилизация вследствие сказанного выше не наступит, даже если в испытуемой сыворотке крови содержится достаточно иммобилизинов.
Контроль с инактивированный комплементом необходим, чтобы исключить неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем под воздействием содержащихся в исследуемой сыворотке крови терапевтических концентраций пенициллина или других трепонемоцидных и трепонемостатических веществ. При этом в контрольной пробирке все или большинство бледных трепонем будут неподвижными, поэтому оценка результатов реакции бывает невозможна.
