Исследованию спинномозговой жидкости в реакции Вассермана предшествует подготовительная работа: приготовление раствора антигенов, гемолитической системы, титрование комплемента, которая производится так же, как и для исследования в этой реакции сыворотки крови. Как правило, для исследования спинномозговой жидкости применяется кардиолипиновый и липоидный вассермановский антигены, но возможно исследование ликвора и с трепонемным ультраозвученным антигеном. По сравнению с сывороткой крови спинномозговая жидкость не обладает выраженными антикомплементарными свойствами, поэтому комплемент в реакцию Вассермана при исследовании ликвора выводится по титру, а не по рабочей дозе, т. е. по его наименьшему количеству, способствующему полному гемолизу бараньих эритроцитов, содержащихся в 0,5 мл гемолитической системы.

Спинномозговая жидкость исследуется в реакции Вассермана неразведенной в объеме 0,5 мл и разведенной изотоническим раствором хлорида натрия 1:1 и 1:4.

Результаты, получаемые при исследовании спинномозговой жидкости в реакции Вассермана, учитываются и регистрируются отдельно по каждому разведению с каждым антигеном. Для обозначения позитивности реакции Вассермана со спинномозговой жидкостью применяется система четырех крестов: полная задержка гемолиза — резкоположительный результат (4 + ); значительная задержка гемолиза — положительный (3 + ); частичная задержка гемолиза — слабоположительный (2+), незначительная задержка гемолиза — сомнительный (1 + ).