Как правило, в реакции Вассермана используются три антигена: кардиолипиновый антиген, отличающийся высокой чувствительностью, неспецифический антиген и ультраозвученный трепонемный антиген, представляющий собой взвесь культуральных трепонем в изотоническом растворе хлорида натрия, обработанную ультразвуковыми волнами. Антигены разводят в этом растворе, согласно способу и титру, указанным на фабричной этикетке.

Для приготовления гемолитической системы объединяют равные объемы 2,5—3% взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, разведенной по утроенному титру. Качество результатов реакции Вассермана обеспечивает точное и четкое титрование нативного или лиофильно высушенного комплемента морских свинок.

В отдельных случаях при отсутствии комплемента морских свинок пользуются в качестве комплемента смесью отрицательных в реакции Вассермана сывороток крови людей. Однако применение активной сыворотки крови человека в качестве комплемента в настоящее время не может быть рекомендовано из-за наличия в ней значительного количества трепонемолабильных нормальных антител (существование их доказано работами последних лет), которые могут определенным образом влиять на окончательные результаты реакции Вассермана.

При титровании комплемента определяют его точную дозу, которая ведет к полному гемолизу 0,5 мл гемолитической системы, т. е. его титр. В реакцию Вассермана комплемент берут по рабочей дозе, т. е. с 20—30% надбавкой к титру в зависимости от степени гемолиза в последних пробирках с меньшими количествами комплемента. Рабочая доза комплемента должна быть определена с достаточной точностью, потому что введение в опыт излишка комплемента, который не свяжется первым комплексом, состоящим из вассермановских антигенов и антител исследуемой сыворотки крови, поведет к формированию второго комплекса, состоящего из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, и наступлению гемолиза. Это будет оценено как отрицательные результаты реакции Вассермана, несмотря на наличие в испытуемой сыворотке крови антител, свидетельствующих о наличии сифилитической инфекции у обследуемого.