Для приготовления антигена, как было сказано выше, используют 7—9-суточные орхиты; в это время клинических проявлений на месте заражения не имеется, кроме небольшой пастозности яичек. Кролика обескровливают и забивают воздушной эмболией, стерильно извлекают яички, измельчают в боксе и заливают средой выживания (примерно 5 мл среды на одно яичко). При этом получается взвесь кусочков ткани яичка в среде выживания. Одну каплю из взвеси помещают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом.
В приготовленном препарате под микроскопом в темном поле зрения сосчитывают количество бледных трепонем, чтобы определить длительность встряхивания для наиболее полного вымывания микроорганизмов из измельченной ткани яичка. Например, при наличии 15—25 бледных трепонем в каждом поле зрения в исходном препарате оптимальное время встряхивания при 3—5 бледных трепонемах — 25—30 мин.
Антиген для РИБТ представляет собой взвесь бледных трепонем в среде выживания с количеством микроорганизмов 10—15 в каждом поле зрения. Это достигается добавлением в нужный объем среды выживания небольшого количества полученной взвеси с огромным количеством микроорганизмов. Например, при 100—150 микроорганизмах в каждом поле зрения в 10 мл среды выживания добавляют 0,1 мл взвеси.
