Принцип. Мочевая кислота в кровяном фильтрате восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив, причем жидкость окрашивается в синий цвет, пригодный для колориметрии.
Реактивы. I) 10% раствор вольфрамовокислого натрия; 2) 2/3 н. серная кислота, получаемая путем смешения 2 частей нормального раствора серной кислоты + 1 часть воды или путем разведения 18,47 мл серной кислоты (удельный вес 1,84) до 1 л воды; 3) раствор цианистого натрия: к 1 л 2,8% водного раствора цианистого натрия добавляют 1,5 мл концентрированного аммиака; раствор нестоек; 4) фосфорновольфрамовый реактив: 100 г вольфрамовокислого натрия растворяют в 600 мл дистиллированной воды, прибавляют 50 г мышьякового ангидрида, 25 мл 85% фосфорной кислоты (удельный вес 1,7) и 20 мл концентрированной соляной кислоты (удельный вес 1,19); реактивы добавляют в том порядке, в каком они здесь перечислены. Полученную смесь кипятят в течение 20 минут, охлаждают, добавляя воды до 1 л; раствор неограниченно стоек; 5) основной стандартный раствор мочевой кислоты: 9 г кристаллического двузамещенного фосфорнокислого натрия и 1 г однозамещенного фосфорнокислого натрия растворяют в 200 мл горячей дистиллированной воды; если нужно, фильтруют, так как раствор должен быть совершенно прозрачным, и доливают горячей дистиллированной водой приблизительно до 600 мл. В мерную колбу емкостью 1 л отвешивают точно 200 мг мочевой кислоты, добавляют несколько миллилитров дистиллированной воды и наливают горячий раствор фосфатов. Взбалтывают, причем мочевая кислота растворяется, и охлаждают под водопроводной водой, добавляют 1,4 мл ледяной уксусной кислоты и доливают до метки. К готовому раствору добавляют 5 мл хлороформа. Раствор не изменяется в течение нескольких месяцев. 5 мл этого раствора содержат 1 мг мочевой кислоты. Из него готовят рабочий стандартный раствор: 10 мл первого раствора отмеривают в колбу емкостью 500 мл, добавляют 25 мл 3,6% соляной кислоты и доливают водой до метки. Раствор можно хранить не более 2 недель; 1 мл его содержит 0,004 мг мочевой кислоты.
Ход определения. 0,2 мл крови (из укола в мякоть пальца) выдувают в пробирку для центрифуги с 1,4 мл дистиллированной воды и при помощи тонкой стеклянной палочки смешивают. Прибавляют 0,2 мл 10% раствора вольфрамовокислого натрия и 0,2 мл 2/3 н. серной кислоты, тщательно смешивают и спустя 10 минут пропускают сквозь маленький фильтр или центрифугируют. Для дальнейшей обработки отмеривают в пробирку 1 мл прозрачного фильтрата, что соответствует 1 мл крови, а во вторую пробирку 1 мл рабочего стандартного раствора мочевой кислоты. В обе пробирки добавляют по 1,8 мл цианистого натрия (3) и по 0,2 мл фосфорновольфрамового реактива (4), тотчас переносят на 3 минуты в заранее доведенную до кипения водяную баню. По истечении этого времени пробирки погружают в стакан с холодной водой и еще через 3 минуты колориметрируют (или фотометрируют) и определяют концентрацию по заранее построенной кривой.
Преимуществом указанного метода является то, что он позволяет избежать внутривенных пункций для забора исследуемой крови. Это тем более важно, если учесть, что уровень урикемии обычно довольно часто контролируется у больных подагрой.
