Ниже приводится описание трех из этих методик, которые являются наиболее распространенными.
Принцип. Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив, давая синюю окраску, пропорциональную ее концентрации в анализируемом образце. Эта окраска сопоставляется с окраской стандартного раствора мочевой кислоты, обработанной в одинаковых условиях.
Реактивы. 1) 10% вольфрамат натрия; 2) 2/3 серная кислота;. 3) 40% карбонат натрия, кристаллический; 4) фосфорновольфрамовый реактив… Смешивают 10 мл 10% вольфрамата натрия, 80 мл 85% фосфорной кислоты и 750 мл дистиллированной воды. Кипятят не менее 2 часов в колбе с обратным холодильником. После охлаждедополняют до метки. 1 мл стандартного раствора равен 0,2 мг мочевой кислоты.
Стандартный раствор может храниться в течение нескольких месяцев на льду в небольших флаконах, герметически закупоренных парафинированием после добавления нескольких капель хлороформа.
Перед употреблением приготовляют рабочий стандарт, разбавляя запасной стандартный раствор в отношении 1: 2. Таким образом, 1 мл рабочего стандартного раствора содержит 0,1 мг мочевой кислоты.
Техника, а) Осаждение белков. К 4 мл сыворотки или плазмы добавляют 4 мл 10% вольфрамата натрия (1), 28 мл дистиллированной воды и 4 мл 2/3 н. серной кислоты. Хорошо встряхивают и через несколько минут фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным, б) Определение. В мерную колбу на 25 мл берут: 20 мл фильтрата (2 мл сыворотки), 1,5 мл 40% карбоната натрия (3) и 0,5 мл фосфорновольфрамового реактива (4). Параллельно приготовляют стандартный раствор, используя и на этот раз мерную колбу на 25 мл, в которую к 1 мл рабочего стандартного раствора (0,1 мг мочевой кислоты) добавляют 1,5 мл 40% карбоната натрия (3) и 0,5 мл фосфорновольфрамового реактива (4). Содержимое обеих колб, приготовленное таким образом, дополняют до метки дистиллированной водой и по истечении 10 минут производят отсчет на колориметре типа Дюбоска.
Примечание. Взятую кровь не стабилизируют оксалатами натрия или калия, так как они дают осадки с реактивами, используемыми при определении мочевой кислоты. По этой причине рекомендуется применение оксалата лития (1 мг/мл крови), который приготовляют следующим образом.
В трехлитровый сосуд к 85 г щавелевой кислоты и 50 г карбоната лития добавляют 1 л горячей воды (70°). Взбалтывают до полного растворения, фильтруют и выпаривают досуха.
Следует отметить, что, по мнению большинства современных исследователей (Kuzell и Gaudin и др.), метод Фолина вполне приемлем для широкой рутинной практики. Однако Lenoch и Havelka рассматривают указанный метод как недостаточно точный.
