Метод иммунофлюоресценции
Coons и Kaplan предложили свой метод иммунофлюоресценции. Он заключается в том, что при воздействии гомологичной иммунной флюоресцирующей сывороткой (гамма-глобулин) на соответствующий антиген, находящийся в клетке, этот антиген соединяется со специфическими антителами и образует светящийся комплекс, видимый в люминесцентном микроскопе.
Успех зависит от качества флюоресцирующих иммунных гамма-глобулинов (обычно лошадиных, кроличьих, меченных флюоресцеинизотиоцианатом), которые должны быть освобождены от неспецифического свечения и содержать высокие титры антител к искомым вирусам: отдельным типам гриппа (А2 и В), парагриппа (типа 1, 2 и 3), аденовирусов (типа 2, 3, 4, 7) и др.
Приводим рекомендации Н. Н. Жилиной при иммунофлюоресцентных исследованиях. Взятый у больного материал должен быть свободен от слизи и обломков клеток, которые могут адсорбировать на себе флюоресцирующий гамма-глобулин и давать неспецифическое
свечение.
Перед взятием мазка полость носа освобождают от избытка слизи и слущенных клеток. Затем энергичными движениями сухим марлевым тампоном берут материал со слизистой оболочки нижней носовой раковины. Вторым тампоном берут мазок из зева (мягкого неба, миндалин, задней стенки глотки). Мазки сразу помещают в физиологический раствор (2—3 мл). Пробирки встряхивают в течение 1—2 минут, затем тампоны удаляют, а содержимое пробирок центрифугируют 5—6 минут при скорости 3000 оборотов в минуту. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а из осадка клеток на тщательно обезжиренных предметных стеклах готовят от каждого больного по 3—4 мазка
Н. Н. Жилина при гриппе получила положительный результат у 55—65% (в первые 3 дня болезни у 69%) больных, a Tatcno и соавторы —в 89% случаев гриппа, подтвержденного серологически. В ранние сроки гриппа антиген преимущественно определялся в ядре или в ядре и цитоплазме, в более поздние сроки — чаще в цитоплазме. Иммунофлюоресценция чаще отмечалась в первые 2— 3 дня болезни, но наблюдалась и на 5—6-й день, а изредка до 14-го дня болезни. (Tateno с соавторами у 7 больных гриппом отмечали иммунофлюоресценцию на 8—23-й день заболевания). Ответ может быть получен через 21/?—3 часа после взятия мазков, т. е. в первый же день поступления больного в клинику.
Методика иммунофлюоресценции для диагностики гриппа (как и парагриппа, аденовирусной инфекции и др.) может быть выполнена не только на мазках, но и в культуре ткани (на первичнотрипсинизированных почечных клетках человека и обезьяны), инфицированной материалами от больного. Пользуясь этим методом, В. К. Наумова получила во время эпидемии гриппа положительный результат в 80,8% случаев. Этот метод уступает в быстроте исследованиям на мазках.
