Препараты для исследования в темном поле зрения готовят на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах. Если материала для исследования мало, например при пункции лимфатического узла, его смешивают с одной каплей изотонического раствора хлорида натрия. Каплю накрывают покровным стеклом. Микроскопическое исследование препарата производят при помощи темнопольного специального конденсора при объективе Х40 и окуляреХЮ или Х15. При исследовании в темном поле нативного препарата из тканевой жидкости можно видеть большое количество мелких твердых частиц, передвигаемых броуновским движением, некоторое количество форменных элементов крови: эритроцитов (элементы правильной круглой формы, темного цвета, окруженные светящимся ободком), лимфоцитов (округлой формы, сероватые, тускло светящиеся), эпителиальных клеток (они значительно крупнее лейкоцитов, неправильно округлой формы, обладают ярким свечением), нейтрофилов (ярко светящиеся зернистые образования).
Обнаружение в таком препарате бледной трепонемы требует достаточного внимания и высокой квалификации врача. Бледная трепонема недостаточно сильно преломляет свет и поэтому имеет вид тонкой пунктирной спирали, так как всегда лучше освещаются выпуклые стороны ее завитков. Для бледной трепонемы характерно то, что она сгибается и делает при этом поступательные движения, скорость которых то увеличивается, то замедляется.