Чувствительность холерных вибрионов
Консистенция колоний маслянистая, они легко эмульгируются и смываются с поверхности агара. При микроскопическом исследовании поверхность колонии гладкая или слегка зернистая, бесцветная, край ровный. Стареющие колонии более крупные, плоские, с слегка запавшим центром и с золотистым оттенком. При микроскопии поверхность колонии зернистая, край неровный. Через 8—10 дней на поверхности колонии появляются вторичные или дочерние колонии. Они имеют вид бугорков различной величины, окрашенных в более темный цвет, чем вся колония. При пересеве вторичных колонии вырастает типичная культура холерных вибрионов.
На косом щелочном агаре через 24 часа при темпер ратуре 37° вырастает блестящий, гладкий, полупрозрачный налет серовато-голубого или слегка кремового цвета. При старении налет становится кремовым или желто-коричневым. На желатиновых пластинках через 24 часа при температуре 22° вырастают очень мелкие, прозрачные, блестящие колонии. Такие колонии через 40—48 часов несколько увеличиваются (0,5 мм в дициметре); при микроскопировании они бесцветные, поверхность их неровная и напоминает битое стекло.
При посеве уколом в столбик желатины через 24 часа при температуре 22° вдоль укола появляется рост в виде белой полосы, более широкой в верхней части. Через 2—3 суток желатина разжижается. Растворение желатины начинается с поверхности и распространяется сверху вниз вдоль укола. Вверху воронки образуете пузырек воздуха за счет высыхания жидкости, позднее разжижение желатины увеличивается и становится многослойным. На поверхности появляется толстая желтоватая пленка и хлопьевидная муть в столбике жидкости.
Для выращивания холерного вибриона на жидких питательных средах употребляются мясопептонны, бульон и 1% пептонная вода.
На щелочном бульоне через 24 часа при температуре 37° холерный вибрион образует равномерное помутнение с легким порошковидным осадком на дне и нерыхлую пленку беловато-серого цвета. Позднее пленка грубеет, становится плотной и падает на дно в виде крупных рыхлых хлопьев и плотных зернышек.
На щелочной пептонной воде холерные вибрионы уже через 6—8 часов при температуре 37° образуют нежную голубоватую, еле заметную, пленку, и легкое помутнение. При осторожном наклонении пробирки пленка хорошо видна на поверхности стекла.
Для роста холерных вибрионов требуются, помимо хлористого натрия и органических веществ, постоянный доступ свободного кислорода, щелочная среда и подходящая температура.
Свободный доступ кислорода — необходимое условие, так как холерный вибрион является строгим аэробом.
Однако следует иметь в виду, что холерный вибрион может расти в отсутствие кислорода при наличии в среде глюкозы. В таких условиях изменяются окислительно-восстановительные процессы, лежащие в основе дыхания вибриона. Эти процессы связаны с переносом электронов и выражаются электрическим потенциалом. Электрический потенциал у холерных вибрионов выше, чем у других вибрионов.
Оптимальной температурой для роста холерного вибриона является 35—38°. Холерный вибрион может размножаться при 16—40°. Ниже 16° рост задерживается или идет очень медленно.
Для размножения холерного вибриона требуется определенная концентрация ионов в среде, оптимальная рН которой лежит между 7,6—8,0. На элективных питательных средах холерный вибрион хорошо растет и при рН = 9,2 (агар Дьедонне).
Принцип изготовления питательных сред для выращивания холерного вибриона основан на учете биологических особенностей холерного вибриона: его потребности в свободном кислороде, его избирательном отношении к щелочной реакции, его неприхотливости и быстроте роста. Употребление простых питательных сред щелочной реакции: пептонной воды, бульона и агара создает условия преимущественного роста на них холерного вибриона. На пептонной воде, кроме того, создаются условия для накопления вибриона на поверхности через 5—8 часов, когда другие кишечные микробы не успевают развиться.
Употребляются для диагностики холерного вибриона и такие сложные элективные питательные среды резко щелочной реакции, как среда Дьедонне (1909), среда Огтоленги (1911) и др., которые также обеспечивают преимущественный рост холерных вибрионов и задерживают рост кишечных микробов при посеве исследуемого материала.
Устойчивость холерного вибриона во внешней среде. Устойчивость холерного вибриона к воздействию различных факторов внешней среды (физических, химических, биологических) в общем невелика и колеблется в зависимости от времени и характера воздействия того или иного фактора.
Устойчивость к физическим факторам. Холерные вибрионы чувствительны к действию света. Прямые солнечные лучи убивают холерных вибрионов в несколько часов, в то время как рассеянный свет оказывает на них слабое действие.
Высушивание губительно действует на холерных вибрионов. В нефиксированных мазках на предметный стеклах после высыхания на воздухе они сохраняют свою жизнеспособность в течение 24 часов.
Холерные вибрионы чувствительны к воздействию высоких температур, но лучше переносят воздействие их во влажной среде, чем в сухой. Во влажной среде при 56° они погибают через полчаса, при 60° — через 10 минут, при 80° — через 5 минут и при 100° — моментально. Сухой жар убивает их при 100°. Они сравнительно более устойчивы к действию низких температур: выдерживают температуру — 5° в течение нескольких дней, некоторые штаммы переносят температуру — 10° и —31°. Холерные вибрионы могут длительное время быть жизнеспособными в снегу и во льду. Установлено, что во льду они сохраняются до 4 месяцев.
Устойчивость к химическим факторам. Холерные вибрионы очень чувствительны к действию хлора. При содержании активного хлора в воде 1 мг/л (разведение 1:1000000) они погибают в течение 15 минут при условии содержания в воде незначительного количества хлора.
Холерные вибрионы могут переносить концентрацию 0,3 мг активного хлора на 1 л дистиллированной воды. Для водных вибрионов предельная доза активного хлора выше и колеблется между 0,5—2 мг на 1 л воды при 30-минутной экспозиции. Переносимой дозой для большинства из них является 1 мг/л.
Обычные дезинфицирующие вещества быстро уничтожают холерных вибрионов. Сулема в разведении 1: 1000 убивает их моментально при отсутствии в среде белковых веществ (испражнений, рвотных масс, отрезков кишок), 1% карболовая кислота — через 5 минут. Холерные вибрионы очень чувствительны к действию слабых разведений кислот. В соляной и серной кислоте в разведении 1: 10 000 они гибнут через несколько секунд.
