Действие холерных вибрионов на кровь испытывается путем посева на жидкие питательные среды, так как на твердых питательных средах в связи с образованием гематина не всегда получаются четкие результаты. При выращивании холерного вибриона на агаровых пластинках с кровью через 24 часа можно наблюдать зеленую зону вокруг колоний от окраски среды гематином, а при росте холероподобных вибрионов — розовую зону окраски гемоглобином. На жидких питательных средах с кровью через 24—48 часов при 37° истинные холерные вибрионы не вызывают гемолиза, а холероподобные в большинстве случаев дают резко выраженный гемолиз. Действие холерных вибрионов на кровь является дифференциальным признаком между холерным и холероподобным вибрионами. Этот признак более постоянен, чем некоторые другие. Несмотря на это, встречаются холерные вибрионы, гемолизирующие эритроцит (вибрионы типа Эль-Тор), однако в большинстве случаев их не признают истинными холерными вибрионами.
Испытание гемолитической способности холерных вибрионов проводится двумя способами: 1) кровь прибавляется к бульону или 1% пептонной воде за 24 часа до посева на нее холерных вибрионов 2) кровь добавляется к выросшей 24-часовой культуре. В обоих случаях добавляется 2% отмытых бараньих эритроцитов (из расчета первоначального объема крови) или 2% дефибринированной крови. Результаты ках с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами получаются одинаковые.
Рекомендуется добавлять кровь за 24 часа до посева культуры с тем, чтобы убедиться в стерильности среды, для чего ее оставляют на 24 часа в термостате при 37°. Стерильные среды прозрачны, с осадком эритроцитов на дне и отсутствием гемолиза. Пробирки перед посевом встряхивают, и они становятся мутно-красными. Кровь можно добавлять и непосредственно перед посевом, но следует учитывать возможность загрязнения среды при добавлении эритроцитов, что может привести к лизису эритроцитов, независимо от засеянной культуры. В обоих методах требуется соблюдение стерильности при обработке крови с тем, чтобы получить точные результаты.
Чтение результатов в первом случае проводится че рез 18—24 часа, а во втором—через несколько часов.
Небезинтересна также способность холерных вибри онов агглютинировать красные кровяные шарики.
Гемагглютинация происходит при добавлении нескольких капель взвеси эритроцитов к эмульсии холерных вибрионов в физиологическом растворе. Для эмульсии берется 18—24-часовая агаровая культура свежевыделенных штаммов холерного вибриона. Через несколько минут кровь окрашивается в фиолетовый цвет и, в то же время, начинает агглютинироваться. При этом выпадают мелкие, быстро оседающие на дно хлопья. В контрольной пробирке взвесь эритроцитов в физиологическом растворе без холерных вибрионов не агглютинируется и имеет алокрасный цвет. Гемагглютинины нестойкие и при 64° разрушаются через 5 минут. Способность холерного вибриона агглютинировать эритроциты барана неустойчива. Она изменяется в зависимости от возраста штамма и состава среды, а поэтому не всегда обнаруживается.
Из всего изложенного видно, что биохимическая активность холерного вибриона весьма разнообразна и может быть использована для его диагностики в сочетании с другими более постоянными признаками. Окончательный диагноз холерного вибриона устанавливается на основании серологических реакций, подкрепленных рядом других признаков, в том числе и биохимических.
Биохимические исследования имеют большое значение в тех случаях, когда встречаются неагглютинирующиеся вибрионы и когда требуется тонкий дифференциальный диагноз между холерным и холероподобным вибрионами.
Культуральные свойства. Рост холерного вибриона на твердых питательных средах (на щелочном агаре, агаре Дьедонне и др.) при температуре 37° начинается через 10—12 часов после посева. На щелочном агаре в это время обнаруживаются очень мелкие, бесцветные, прозрачные колонии, которые следует рассматривать в лупу или под микроскопом при малом увеличении.
