При определении в плазме (или сыворотке) отмеривают в две эрленмейеровские колбочки А и Б по 1 мл исследуемой пробы. В колбочку А добавляют 10 мг препарата уриказы и обе колбочки оставляют в термостате в течение 2 часов при 37°.
По прошествии этого времени к содержимому каждой колбочки добавляют по 7 мл воды, 1 мл 0,33 н. раствора серной кислоты и 1 мл 10% раствора вольфрамовокислого натрия, взбалтывают и центрифугируют. Из каждой центрифужной пробирки отмеривают по 5 мл прозрачного безбелкового фильтрата в другие две пробирки (А и Б).
Одновременно ведут опыт с раствором 10 мг уриказы в 1 мл воды (колбочка В) и холостой опыт с одной только водой (колбочка Г). Таким образом получают четыре пробирки А, Б, В и Г, которые ставят в ледяную баню. Когда содержимое пробирок охладится, в каждую пробирку отмеривают по 3 мл охлажденной смеси равных объемов реактива 1 и реактива 2, быстро смешивают, встряхивая пробирки, и тотчас ставят их в ледяную баню, где оставляют в течение 60 минут (точно!).
Затем к содержимому каждой пробирки добавляют по 2,5 мл реактива для цветной реакции, смешивают и ставят в водяную баню при 25°. Через 20 минут пробирки вынимают из водяной бани и ведут отсчет в фотоэлектрическом колориметре (фильтр 540 m/г). Для пробы А гальванометр устанавливают на 100 по пробе В (раствор уриказы), тогда как холостой опыт Г (вода) служит для установки на 100 гальванометра в том случае, когда отсчет ведут в пробе Б (не подвергавшейся действию фермента).
Расчет ведут по стандартной кривой, которую получают путем определения серии стандартных растворов, содержащих 2—16 мг% мочевой кислоты.
Содержание «истинной» мочевой кислоты получают путем вычитания результата определения в пробе, подвергавшейся воздействию уриказы, из результатов определения в пробе, не обработанной ферментом. Точность метода около 5%.
